Roche HiFi Kits 擁有領先業界品牌的最高正確性和穩定性能，已經被廣泛使用於各實驗中，從 Cloning 到 NGS 皆可發揮其低錯誤率、高靈敏度的效能。本文簡述 Roche HiFi Kit 特點，並介紹最新應用。

Roche HiFi kits 的特點
■ 高效能 - 擴增長度高達11kb、有效減少AT-、CG- rich 區域偏差




■ 極低錯誤率 - Error rate (per nt) 2.8X10^-7

最新應用
應用 1：Single-cell transcriptomics 
實驗顯示使用 KAPA HiFi 可精準擴增cDNA，大幅降低 GC bias
■ 可偵測更多 high GC content 片段
■ 得到與 No preamplification 相似的結果


Reference: 
Picelli, et al. Nature Protocols, 2014 vol 9: pages 171 – 181
Picelli, et al. Nature Methods 2013 vol. 10, no. 11: pages 1096 – 1098
Ramskold, et al. Nat Biotechnol. 2012 vol. 30, no. 8: 777 – 782

應用 2：CRISPR amplicon screening
KAPA HiFi 提供最佳序列正確性 (fidelity)，可精確複製 Amplicons，有利篩選 CRISPR/Cas9 clones

應用3：CIRCLE-seq for CRISPR/Cas9 Off-target Screening
KAPA HiFi 可提升 CIRCLE-seq 的精準度，確保檢測到的突變點非擴增偏差。
■ 錯誤率較 Taq 低 50-100 倍
■ 具 3’→5’ exonuclease 之校正能力 (proofreading activity)



Reference:
CIRCLE-seq: a highly sensitive in vitro screen for genome-wide CRISPR–Cas9 nuclease off-targets. Tsai et al. Nature Methods, 2017 vol 14: pages 607 – 614

Application Note
 Single-cell transcriptomics 
 CRISPR/Cas9-based genome editing and validation screening 
 CIRCLE-seq for CRISPR/Cas9 Off-target Screening